摘要
目的建立高效液相色谱法(HPLC)测定犬全血中羟喜树碱两种活性成份羧酸型羟喜树碱(CHCPT)和内酯型羟喜树碱(LHCPT)含量的方法。方法采用HPLC荧光法,检测器激发波长为363nm,发射波长为550nm,DiscoveryC18色谱柱,流动相为甲醇乙腈三乙胺-0.05mol·L-1磷酸氢二钾缓冲液(345160,pH6.8),流速1.0ml·min-1,N2000色谱工作站采集数据,外标法计算药物浓度。结果全血样品中CHCPT、LHCPT峰分离良好,内源性杂质不干扰样品峰,最低检测浓度为2.5μg·L-1。CHCPT、LHCPT浓度范围在2.5~1500μg·L-1间呈线性相关,回归方程分别为y=11196x-921.56和y=11840x-5188.4,相关系数分别为r=0.9998和0.9991,绝对回收率分别为85.5%~98.6%和78.4%~89.1%,相对回收率分别为100.7%~103.9%和96.8%~102.0%,日内和日间变异均小于15.0%,提取后样品-75℃冻存7d稳定。结论本实验方法具有专属性,且灵敏、可靠,适用于HCPT类制剂给药后血药浓度的检测,有助于深入研究HCPT两种活性成份CHCPT和LHCPT在体内的药代动力学特征。
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