新型冠状病毒水貂变异株重组水泡性口炎病毒载体假病毒的拯救及鉴定

作者：王申; 王玮琦; 闫飞虎^*; 冯娜; 赵永坤; 王铁成; 高玉伟; 杨松涛^*; 夏咸柱

来源：中国兽医学报, 2022, 42(04): 668-674.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.04.09

• 新型冠状病毒
• 水貂变异株
• 水泡性口炎病毒
• 假病毒

为拯救新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)水貂变异株重组水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)载体假病毒，并对该假病毒进行鉴定。基于本实验室构建的VSV反向遗传系统，使用SARS-CoV-2的刺突蛋白(S)基因替换全长cDNA克隆P3.1-VSV-eGFP中的VSV糖蛋白(G)基因，得到重组cDNA克隆P3.1-VSV△G-S-eGFP。将P3.1-VSV△G-S-eGFP与分别能表达VSV核蛋白N、磷蛋白P、聚合酶L及G的4个辅助质粒共转染细胞以拯救携带绿色荧光标签的重组假病毒VSV△G-S-eGFP,并通过荧光显微镜观察；生长动力学曲线检测；RT-PCR鉴定；Western blot鉴定及透射电镜观察对重组假病毒进行鉴定。经鉴定重组假病毒VSV△G-S-eGFP拯救成功并可在细胞中有效增殖；VSV△G-S-eGFP的最高生长滴度可达106.8TCID50/mL。本研究拯救的重组假病毒VSV△G-S-eGFP为SARS-CoV-2水貂变异株抗体筛选、疫苗评估提供了有力工具。

• 单位
  中国农业科学院; 吉林大学