微RNA-758/星形细胞上调基因1信号通路调控肝癌细胞转移的分子机制

作者：李聪; 王宏光; 吕俊生; 龙江; 扈彩霞; 尹甜; 崔石昌; 张雯雯; 王勋; 生守鹏; 张洪海; 孙玉; 郑加生

来源：中华肝胆外科杂志, 2017, 23(10): 689-693.

• 微RNA,miR-758
• 星形细胞上调基因-1
• 肝癌
• 肿瘤转移

目的探讨微RNA(miR)-758对肝癌细胞转移的影响及其作用机制,研究miR-758对促癌基因星形细胞上调基因1(AEG-1)的调控作用。方法用miR-758瞬时转染HepG2细胞,通过Transwell迁移和侵袭实验,观察miR-758对肿瘤细胞转移的影响。利用CCK8法检测细胞增殖活性,观察miR-758对肿瘤细胞增殖的影响。使用流式细胞仪定量分析细胞周期,观察miR-758对细胞周期的影响。通过上皮间充质转化(EMT)实验,观察miR-758是否影响肝癌细胞EMT。用miR-758瞬时转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),观察miR-758对管腔形成的影响。软件预测显示miR-758的靶基因为AEG-1。将含miR-758结合位点的AEG-1 3’UTR构建到荧光素酶表达载体中,用miR-758和AEG-1基因3’UTR载体共同转染HepG2细胞,验证miR-758的靶基因是否为AEG-1。用miR-758瞬时转染HepG2细胞,检测AEG-1蛋白的表达量变化。结果 miR-758过表达可抑制HepG2细胞的迁移、侵袭,抑制细胞增殖和周期,抑制HepG2细胞EMT,抑制HUVEC细胞管腔形成。miR-758和AEG-1基因3’UTR质粒共同转染HepG2细胞后,荧光素酶的表达量降低。miR-758靶点AEG-13’UTR突变后,荧光素酶的表达量恢复。另外,细胞中miR-758含量升高时,Western Blot检测到AEG-1蛋白水平的表达量降低。结论 miR-758负调控癌症转移的多个步骤,包括细胞迁移、侵袭、增殖、EMT以及血管新生等。miR-758下游靶基因为AEG-1。

• 单位
  首都医科大学; 首都医科大学附属北京佑安医院; 中国人民解放军总医院