摘要
目的观察松花粉对人肝癌SK-Hep-1细胞凋亡和自噬的影响,探讨松花粉抗肿瘤作用及机制,为松花粉的临床应用提供实验依据。方法体外培养SK-Hep-1细胞,随机分为4组,分别为对照组、松花粉小剂量组(30 mg/mL)、松花粉中剂量组(45 mg/mL)、松花粉大剂量组(60 mg/mL)。CCK-8法检测不同浓度松花粉干预不同时间(12、24、48、72 h)后的SK-Hep-1细胞抑制率;松花粉处理48 h后,相差显微镜和Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学;流式细胞术观察细胞凋亡率;RT-PCR检测自噬相关mRNA表达水平。结果 CCK-8法检测显示,松花粉能显著抑制SK-Hep-1细胞增殖,并具有时间和剂量依赖性;相差显微镜显示松花粉可以抑制细胞的增殖;Hoechst33258荧光染色显示,与对照组比较,松花粉小、中、大剂量组细胞形态发生明显的凋亡样改变;Annexin V-FITC/PI双染法结果显示,与对照组比较,松花粉小、中、大剂量组细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P <0.05或P <0.01);RT-PCR分析显示,与对照组比较,松花粉干预48 h后,松花粉小、中、大剂量组Beclin-1、LC3-Ⅱ表达明显上调,而P62表达下调,差异均有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。结论松花粉能有效抑制人肝癌SK-Hep-1细胞增殖,促进其凋亡,并诱导其发生自噬,松花粉可能通过诱导自噬促进肝癌细胞凋亡。
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