体外光化学疗法预防小鼠急性移植物抗宿主病作用及其机制

作者：程占睿; 林雨薇; 钟妍; 张阿龙; 徐海霞; 田力^*; 刘忠^*

来源：中国输血杂志, 2023, 36(10): 860-867.

DOI：10.13303/j.cjbt.issn.1004-549x.2023.10.002

• 体外光化学疗法
• 异基因造血干细胞移植
• 急性移植物抗宿主病
• 细胞疗法

目的 探讨体外光化学疗法(extracorporeal photopheresis, ECP)诱导的早期凋亡脾脏单个核细胞对小鼠急性移植物抗宿主病(acute graft versus host disease, aGVHD)的预防效果并初步探究其作用机制。方法 1)提取C57BL/6小鼠的脾脏单个核细胞，用不同浓度8-MOP(50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL, 300 ng/mL, 600 ng/mL)处理后2J/cm2的紫外线照射，通过Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测细胞的早期凋亡率，确定实验最适宜的8-MOP浓度。2)取6～8周龄SPF级雌性BALB/C小鼠(H-2Kd)35只，X射线8Gy全身照射后分为5组：单纯照射组尾静脉回输生理盐水0.2 mL;同基因骨髓移植组尾静脉回输BALB/C小鼠骨髓有核细胞悬液0.2 mL(含细胞量1×107);异基因骨髓移植组尾静脉回输C57BL/6小鼠骨髓有核细胞悬液0.2 mL(含细胞量1×107);aGVHD组尾静脉注射C57BL/6小鼠骨髓有核细胞(含细胞量1×107)和脾脏单个核细胞(含细胞量1×107)混合液0.2 mL;ECP预防aGVHD组移植前48h预先尾静脉回输ECP处理过的C57BL/6小鼠脾脏单个核细胞0.2 mL(含细胞量1×107),移植当天尾静脉注射C57BL/6小鼠骨髓有核细胞(含细胞量1×107)和脾脏单个核细胞(含细胞量1×107)混合液0.2 mL。观察ECP对aGVHD的预防效果，应用CBA法检测各组小鼠血清IFN-γ,IL-2、 TNF、IL-4和IL-6浓度；流式细胞术检测Th1类细胞的计数。结果 不同浓度8-MOP(50 ng/mL, 100 ng/mL, 200 ng/mL, 300 ng/mL, 600 ng/mL)处理后小鼠脾脏单个核细胞的早期凋亡率(%):(14.18±0.865)vs(16.76±0.407)vs(18.83±0.404)vs(19.27±0.404)vs(14.5±0.529),确定8-MOP的最适宜浓度为200 ng/mL。在体内实验中，aGVHD组较同基因骨髓移植组和异基因骨髓移植组生存率下降、体重减低、临床评分增高(P<0.01,P<0.01),且移植后小鼠骨髓细胞嵌合率大于90%;ECP可以显著改善移植后小鼠存活率，降低临床评分(P<0.05),并降低血清Th1类细胞因子浓度(P<0.05)和脾脏中Th1类细胞的计数(P<0.05)。结论 ECP诱导的早期凋亡脾脏单个核细胞可以通过降低小鼠体内Th1类反应来预防aGVHD的发生。

• 单位
  中国医学科学院北京协和医学院; 公共卫生学院; 安徽医科大学