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摘要
目的:制备稳定性好、特异性强、灵敏度高的肌酸激酶同工酶质控品。方法:将密码子优化后的肌酸激酶M亚基和B亚基序列合成后构建表达载体PET28-M、PET28a-B;将其分别转入BL21(DE3)后,用0.5 mmol/L IPTG 37℃诱导表达得到肌酸激酶同工酶MM和BB;MM和BB分别经Ni2+纯化后按一定比例混合处理、完成后期折叠得到MB;研究蛋白MB最佳冻干工艺,并跟踪冻干品稳定性。结果:目的蛋白M亚基和B亚基分子量大小均为45 kD左右,1:1混合25℃静置16 h后具有较高的灵敏度和较强的特异性。蛋白冻干后形态良好,37℃可以稳定保存11d;25℃、4℃可以稳定保存4个月以上。结论:该蛋白的冻干制品成本低、稳定性好、特异性强、灵敏度高,可用于定性定量肌酸激酶同工酶CK-MB检测试剂盒的质控品。
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