褐色喜热裂孢菌Thermobifida fusca产麦芽糖α-淀粉酶基因的克隆表达及酶学性质研究

作者：薛蓓; 王治宾; 刘振东; 韦宇拓

来源：食品工业科技, 2013, (24): 214-218+231.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2013.24.040

• 褐色喜热裂孢菌
• 麦芽糖α-淀粉酶基因
• 信号肽
• 克隆表达
• 麦芽糖
• 酶学性质 Thermobifida fusca
• maltose-producing α-amylase gene
• signal peptide
• cloning and expression
• maltose
• enzymatic properties

以T.fusca基因组DNA为模板,PCR分别扩增不包括和包括其基因前段信号肽的产麦芽糖淀粉酶的基因片段tfa和sptfa,并克隆至表达载体pSE380上,获得重组质粒pSE380-tfa和pSE380-sptfa,以大肠杆菌JM109为宿主细胞大量表达融合蛋白,利用金属镍亲和层析对菌株JM109/pSE380-tfa表达的α-淀粉酶进行纯化,SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为64ku,K m值为1.305mg/mL,最适反应温度为60℃,最适pH为7.0;检测到菌株JM109/pSE380-sptfa的培养基上清有相当一部分酶活。本研究麦芽糖α-淀粉酶与可溶性淀粉反应,经HPLC检测产...

• 单位
  成都蓉生药业有限责任公司; 西藏农牧学院; 广西大学