RNA干扰下调SOX9表达抑制肝癌细胞的增殖

作者：罗琴; 杨欣荣; 汪宁; 顾帝水; 胡方园; 樊嘉; 覃文新

来源：肿瘤, 2014, 34(05): 404-412.

• 肝肿瘤
• 性别决定区Y蛋白质
• 细胞增殖
• RNA,小分子干扰

目的:分析转录因子性别决定区Y框蛋白9(sex-determining region Y box protein 9,SOX9)在肝癌组织中的表达情况,并探讨其对肝癌细胞增殖的调节作用及分子机制。方法:分析肝癌表达谱芯片数据中SOX9的表达情况,并采用实时荧光定量PCR法在32对肝癌组织及癌旁肝组织中进行验证。构建靶向干扰SOX9的慢病毒载体pGreenPuro?-SOX9-shRNA,并用慢病毒感染的方法转入肝癌细胞Huh7中;采用实时荧光定量-PCR法及蛋白质印迹法检测SOX9的干扰效果。采用CCK-8(cell counting kit-8)法、克隆形成实验、FCM法和衰老相关β半乳糖苷酶(senescence-associated beta-galactosidase,SA-β-Gal)染色等方法检测细胞的增殖能力和衰老情况。最后,采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测SOX9可能调节的下游基因。结果:肝癌表达谱芯片数据分析结果显示,SOX9在肝癌组织中高表达(P<0.000 1),并在32对配对的肝癌组织及癌旁肝组织中得到验证(P=0.009 5)。靶向干扰Huh7细胞中SOX9的表达可抑制细胞的增殖并促进衰老。SOX9表达下调可降低增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)、细胞周期蛋白A2(cyclin A2,CCNA2)、细胞周期蛋白E2(cyclin E2,CCNE2)和核转录因子E2F-2基因的表达;肝癌组织表达谱芯片数据分析结果显示,它们的表达与SOX9存在一定的相关性。结论:SOX9在肝癌组织中高表达,可以调节肝癌细胞的增殖和衰老,且其分子机制可能通过影响细胞周期蛋白及核转录因子E2F-2等增殖调控基因的表达而实现。

• 单位
  癌基因与相关基因国家重点实验室; 上海市肿瘤研究所; 上海交通大学医学院附属仁济医院