CRISPR/Cas13系统敲减HEK293T细胞ku70和lig4基因表达

作者：王豪强; 李国玲; 黄广燕; 李紫聪; 郑恩琴; 徐铮; 杨化强; 吴珍芳; 张献伟^*; 刘德武^*

来源：生物工程学报, 2020, 36(07): 1414-1421.

DOI：10.13345/j.cjb.190494

• CRISPR/Cas13
• ku70
• lig4
• 基因敲减

成簇的规律间隔的短回文重复序列(Clusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeats,CRISPR)/CRISPR相关蛋白(CRISPR-associatedproteins,Cas)系统是目前基因编辑、基因表达研究的热点,其中靶向RNA的CRISPR/Cas13系统的开发为RNA的干扰和编辑提供了新的方向。文中针对HEK293T细胞非同源末端连接(Nonhomologousendjoining,NHEJ)通路修复关键因子Ku70和Lig4的编码序列,设计并合成CRISPR/Cas13a、b系统相应的gRNA,检测其对ku70和lig4基因表达的影响。结果显示,Cas13a对ku70和lig4的RNA敲减效果可以达到50%以上,Cas13b对ku70和lig4的RNA敲减效果分别达到92%和76%;同时Cas13a、b系统能将Ku70和Lig4蛋白水平分别下调至68%和53%。CRISPR/Cas13系统可有效敲减HEK293T细胞RNA和蛋白质表达,为基因功能和调控研究提供一种新的策略。

• 单位
  温氏食品集团股份有限公司; 华南农业大学