DEPDC1B结合p65在肝癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长中的作用及机制研究

作者：胡志勇; 张海; 顾磊; 文斐

来源：国际消化病杂志, 2024, 44(1): 48-54,63.

DOI：10.3969/j.issn.1673-534X.2024.01.010

• 肝癌细胞
• 荷瘤小鼠
• DEP结构域蛋白1B
• NF-κB

目的 研究DEP结构域蛋白 1B(DEPDC1B)在肝癌细胞和荷瘤小鼠肿瘤生长中的作用及相关机制.方法 分别将过表达DEPDC1B的质粒(oe-flag-DEPDC1B)与对照质粒(oe-NC)转染至H22 肝癌细胞系中,采用蛋白质印迹法检测flag和DEPDC1B蛋白表达水平,采用CCK-8 法检测细胞增殖能力.通过flag抗体富集flag-DEPDC1B结合蛋白,通过质谱进行鉴定,并对免疫共沉淀物进行关键蛋白验证.在oe-flag-DEPDC1B转染细胞中加入p65 抑制剂Helenalin,采用实时荧光定量PCR法检测IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平,采用CCK-8 法检测细胞增殖能力.分别将oe-flag-DEPDC1B和oe-NC转染细胞注射至C57/B6 小鼠皮下,注射后 2周开始监测小鼠肿瘤体积,注射后5周处死小鼠.分别采用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法和ELISA法检测肿瘤组织中DEPDC1B、p65、IL-1β、IL-6 和TNF-α的表达水平.结果 与oe-NC组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B组细胞中DEPDC1B蛋白表达水平显著升高,细胞增殖能力显著增强(P均＜0.05).flag-DEPDC1B可结合关键蛋白p65,免疫沉淀物中可以检测到p65蛋白.与oe-NC组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平均显著升高(P均＜0.05).与oe-flag-DEPDC1B组细胞比较,oe-flag-DEPDC1B+Helenalin组细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平均显著降低,细胞增殖能力均显著减弱(P均＜0.05).在荷瘤小鼠中,与oe-NC组小鼠比较,oe-flag-DEPDC1B组小鼠的肿瘤体积增长更快,肿瘤组织中DEPDC1B、p65、IL-1β、IL-6 和TNF-α的表达水平均显著升高(P均＜0.05).结论 DEPDC1B可通过结合NF-κB信号通路中关键蛋白p65激活NF-κB信号通路,促进肝癌生长.

• 单位
  黄石市中心医院; 湖北理工学院