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摘要
DJ-1突变或缺失导致帕金森病相关症状，但其具体功能和致病机理尚在研究和探讨阶段。盘基网柄菌Dictyostelium discoideum是研究神经退化性疾病的模式生物之一，为了研究DJ-1基因在帕金森病中的作用机制，本研究设计特异性引物对盘基网柄菌DJ-1基因或其部分片段(75～479 bp)进行PCR扩增，再通过两步克隆法先对目的基因和pUC18质粒进行酶切、连接、大肠杆菌Escherichia coli DH5α转化、菌株蓝白斑筛选和目的片段测序，构建了盘基网柄菌DJ-1基因的原核表达载体pPROF681和pPROF682。经酶切鉴定和序列测定确认后，再利用引物中的第二限制性内切酶(SacⅠ, Bam HⅠ, Eco RⅠ和XhoⅠ)进行酶切，将目的基因插入盘基网柄菌质粒pDNeo2和pPROF267，构建了DJ-1基因的重组真核表达载体pPROF688和pPROF690，为后期培育含重组载体的盘基网柄菌转化株、进行菌株筛选和鉴定、分析DJ-1的表达量与盘基网柄菌表现型之间的相关性，并进一步建立帕金森病相关基因DJ-1的盘基网柄菌模型奠定基础。
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