幽门螺杆菌菌落PCR的优化

作者：刘芳; 王彩霞; 綦廷娜; 吴芳草; 文学琴; 陈峥宏^*; 崔古贞^*

来源：贵州医科大学学报, 2019, 44(07): 762-766.

DOI：10.19367/j.cnki.1000-2707.2019.07.004

• 螺杆菌,幽门
• 高通量筛选
• 分子诊断技术
• 煮沸速冻裂解法
• 菌落PCR

目的:通过对常规菌落PCR方法进行优化,探索提高幽门螺杆菌(H.pylori)菌落PCR扩增效率的方法。方法:提取H.pylori 26695基因组DNA作为阳性对照组,以未经任何处理的H.pylori 26695菌落作为阴性对照组,经煮沸裂解速冻法获得的H.pylori 26695菌落作为试验组,随机选择8个不同的基因(16S r DNA、cag A-U、cag A-D、ice A、ure A、het A、rop N、Hp0792)作为菌落PCR的候选基因进行菌落PCR验证,最后以1%琼脂糖凝胶进行电泳检测。结果:在选择的目标基因中,阴性对照组未扩增出目的条带,试验组与阳性对照组均扩增出目的相应大小的条带;与常规菌落PCR比较,煮沸速冻裂解法能显著提高H.pylori菌落PCR的扩增效率。结论:煮沸速冻裂解法可用于H.pylori的高通量筛选鉴定和分子诊断。

• 单位
  贵州医科大学; 基础医学院