RNA干涉鼻咽癌细胞Raf-1基因表达的实验研究

作者：刘立中; 梁传余; 窦艳玲; 田聆; 魏于全; 文艳君; 李炯; 邓红新; 阚兵

来源：中华耳鼻咽喉头颈外科杂志, 2006, (11): 805-808.

• 鼻咽肿瘤
• 原癌基因蛋白质
• c-caf类
• 基因

目的研究应用载体介导的RNA干涉技术特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞株HNE1中的表达以及对其生物学行为的影响。方法构建利用U6启动子转录功能的shRNA的载体,在U6启动子下游分别插入含针对Raf-1基因不同位点的特异性RNA干扰序列-67bp寡核苷酸片段,并编号命名为:pshuttle-Raf-1-a(225),pshattle-Raf-1-b(358)和pshuttle-Raf-1-c(474)。将构建的质粒通过脂质体转染人鼻咽癌细胞株HNE1,用RT-PCR分析Raf-1基因的mRNA的表达,流式细胞仪检测转染后HNE1细胞的凋亡率。结果3种含有针对Raf-1基因不同特异性序列的质粒转染后均能干扰该基因在HNE1细胞中的表达,其中以pSIRENshuttle-Raf-1-b(358)作用最为明显。RT-PCR检测Raf-1基因mRNA表达量下降,流式细胞仪检测细胞凋亡率增加,达到65%。结论应用载体介导的RNAi技术可特异性干扰Raf-1基因在鼻咽癌细胞HNE1中的表达,使该细胞凋亡率增加,Raf-1基因相对应的mRNA表达下降。

• 单位
  四川大学华西医院; 四川大学; 生物治疗国家重点实验室; 新疆医科大学第一附属医院