胆道闭锁患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达

作者：董瑞; 赵瑞; 郑珊; 宋再; 孙松

来源：中国循证儿科杂志, 2011, 6(03): 220-224.

• 胆道闭锁
• DNA甲基化
• ITGAL基因
• 5氮-杂胞苷

目的研究胆道闭锁(BA)患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区DNA甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法选取2010年4~8月于复旦大学附属儿科医院(我院)初诊、并经外科手术病理学检查证实为BA的患儿为研究对象,分为BA组和甲基化结果验证组;选取我院同期行斜疝手术、日龄≤120 d和肝功能、肾功能正常的患儿为对照组。分离BA组和对照组CD4+和CD8+T细胞,提取DNA和RNA,行ITGAL基因启动子区DNA甲基化水平和mRNA表达水平检测。甲基化结果验证组分离细胞后,予5-氮杂胞苷干预和培养后,行甲基化水平和mRNA表达水平检测,验证研究结果。结果 BA组和对照组各20例进入研究,两组年龄和性别均匹配。①BA组和对照组CD4+和CD8+T细胞ITGAL基因启动子序列-250~250 bp均未发生甲基化。BA组CD4+T细胞-1450~-950 bp的CG二核苷酸平均甲基化水平显著高于CD8+T细胞(0.94vs0.75,P=0.02),也显著高于对照组CD4+T细胞(0.94vs0.66,P<0.001)。②BA组外周血CD4+T细胞ITGALmRNA表达显著低于CD8+T细胞(0.021±0.002vs0.032±0.004,P=0.013),也显著低于对照组(0.021±0.002vs0.031±0.003,P=0.007)。BA组CD8+T细胞ITGALmRNA表达与对照组差异无统计学意义(0.032±0.004vs0.034±0.006,P=0.266)。③甲基化验证组纳入5例BA患儿。验证结果显示,5-氮杂胞苷干预后CD4+和CD8+T细胞ITGAL启动子区平均甲基化水平均显著低于未予5-氮杂胞苷干预的水平;ITGALmRNA的表达均显著高于未予5-氮杂胞苷干预的水平。结论 BA患儿外周血CD4+T细胞ITGAL启动子区发生高甲基化,并对mRNA表达产生影响。

• 单位
  复旦大学附属儿科医院