牛ATG10基因的克隆、原核表达、纯化和生物信息学分析

作者：贺渊秀; 付强; 塞力克·杰恩斯; 李丹; 葛丽娟; 史慧君^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2023, (11): 15-137.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.05.0132

• 自噬相关基因10(ATG10)
• 基因克隆
• 原核表达
• 纯化
• 生物信息学分析

为了获得牛自噬相关基因10(ATG10)蛋白，试验参照GenBank中牛ATG10基因设计引物，PCR扩增ATG10基因，与pET-N-His-TEV载体连接，测序鉴定正确后用IPTG诱导ATG10蛋白表达，利用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化，Western-blot鉴定ATG10蛋白表达情况，通过生物信息学在线软件对ATG10蛋白进行分析，获得其相应的理化性质及参数。结果表明：克隆得到的ATG10基因序列长度约为705 bp,测序鉴定正确后得到pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体，IPTG成功诱导表达了ATG10蛋白，分子量为28 ku; ATG10蛋白与兔抗ATG10抗体特异性结合；ATG10蛋白是一种较为稳定的、含38个潜在的磷酸化位点、无跨膜区及信号肽的亲水性蛋白，二级结构中无规则卷曲占比44.44%,与ATG5、ATG12、ATG16L1、ATG3等多个自噬相关蛋白相互作用。说明试验成功构建出pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体，并获得ATG10蛋白。

• 单位
  新疆农业大学