草鱼NCCRP-1和IL-10的表达、抗体制备及组织病理变化

作者：陈静妮; 代礼平; 雷燕; 胡海浩; 黄鉴涛; 简纪常; 闫秀英^*

来源：广东海洋大学学报, 2021, 41(05): 10-18.

• 草鱼
• 非特异性细胞毒性细胞受体-1
• 白细胞介素-10
• 表达
• 多克隆抗体
• 组织病理学

【目的】制备草鱼（Ctenopharyngodon idella）非特异性细胞毒性细胞受体蛋白-1 （NCCRP-1）和白细胞介素-10 （IL-10）的抗血清,探讨重组NCCRP-1和IL-10免疫在草鱼抗病毒感染过程中肾脏和肠病理学变化及对NCCRP-1和IL-10表达的影响。【方法】应用PCR扩增技术获得草鱼NCCRP-1和IL-10开放阅读框ORF,构建原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10;用表达的重组蛋白分别制备兔抗NCCRP-1和IL-10的抗血清,并采用ELISA方法测定抗血清的效价;分别用重组NCCRP-1和IL-10免疫草鱼,并用草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）GD108攻毒,感染7 d后制备草鱼肾脏和肠的病理切片,用定量PCR和western blot检测NCCRP-1和IL-10的表达。【结果】草鱼NCCRP-1和IL-10的ORF分别编码237个和179个氨基酸;草鱼NCCRP-1和IL-10的原核表达载体pET-NCCRP和pET-IL10在大肠杆菌（Escherichiacoli）BL21中成功诱导表达,最优表达条件分别是0.1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）37℃诱导4 h和1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导6 h,western blot分析表明重组表达的蛋白为目的蛋白;制备兔抗NCCRP-1和IL-10抗血清的效价均高达1∶40 000,免疫和攻毒后,NCCRP-1免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较轻,且NCCRP-1在肾脏与肠中的表达量显著上调（P <0.05）;IL-10免疫组草鱼肾脏与肠的病理变化较重,IL-10在肾脏与肠中的表达量变化不显著。【结论】外源性NCCRP-1免疫后增强了草鱼抵御GCRV-GD108感染的免疫应答,NCCRP-1对草鱼抗GCRVGD108感染效果显著;而外源性IL-10免疫后,其对草鱼抗GCRV GD108感染效果不显著。

• 单位
  广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室; 广东海洋大学; 广州利洋水产科技股份有限公司