牛樟芝se原核表达载体构建及重组蛋白的表达、纯化

作者：李晶; 李芳娜; 林雄杰; 王锦锋; 林占熺

来源：江苏农业科学, 2017, 45(16): 50-53.

DOI：10.15889/j.issn.1002-1302.2017.16.011

• 牛樟芝
• 鲨烯环氧酶
• 原核表达
• 正交设计

鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)是多数中草药植物、药用菌中三萜合成途径中的限速酶,能影响三萜含量的积累。构建了牛樟芝鲨烯环氧酶基因(se)原核表达载体,并进行其重组蛋白诱导表达条件优化。以牛樟芝c DNA为模板扩增se,纯化后将其克隆到p MD18-T载体上,筛选阳性克隆并将其连接到原核表达载体p ET28a,构建重组质粒p ET-28a-se,经酶切验证后转化E.coil BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,利用L9(34)正交试验优化目的蛋白诱导表达条件及纯化。结果表明,不同正交处理间的蛋白表达差异显著(P<0.05),其诱导因素的主次为时间>温度>IPTG浓度,诱导时间对重组蛋白表达影响最显著(P<0.05)。而IPTG浓度和温度对重组蛋白表达影响并不显著(P>0.05),且当IPTG终浓度为0.2 mmol/L,诱导时间为7 h,诱导温度为26℃时,对SE重组蛋白的诱导效果最佳。

• 单位
  福建农林大学; 福建省农业科学院果树研究所; 国家菌草工程技术研究中心