靶向小鼠Idua基因的CRISPR/Cas9系统构建及打靶效率分析

作者：郭俊璠; 于鸿浩; 付灿; 岳鹏鹏^*

来源：基因组学与应用生物学, 2021, 40(03): 1400-1409.

DOI：10.13417/j.gab.040.001400

• Idua
• CRISPR/Cas9
• 打靶效率
• 黏多糖贮积症

黏多糖贮积症(mucopolysaccharidosis, MPS)是一种遗传代谢病。人IDUA基因编码的α-L-艾杜糖苷酶(α-L-iduronidase, IDUA)功能异常是导致Ⅰ型MPS的主要病因。本研究拟构建特异性靶向小鼠Idua基因的CRISPR/Cas9编辑系统,用以模拟人IDUA基因突变,为建立精准模拟Ⅰ型MPS的细胞模型和动物模型提供高效基因编辑系统。本研究筛查了人类IDUA基因的致病突变,并将候选突变位点定位于小鼠Idua基因上,作为拟突变位点。然后通过sg RNA的设计、表达质粒构建、转染、药物筛选、TA克隆测序等步骤证明了设计的sg RNA具有高效的打靶效力。本研究结果对深入研究MPS的致病机制和探讨MPS的治疗具有重要意义。

• 单位
  桂林医学院