14型肺炎球菌多糖双抗体夹心ELISA检测方法的建立

作者：但傲欢; 曾华英; 张伟; 邹莎莎; 张玉洁; 陈思; 邓前; 刘威

来源：国际生物制品学杂志, 2020, 43(04): 176-180.

• 链球菌,肺炎
• 肺炎球菌菌苗
• 疫苗,结合
• 酶联免疫吸附测定

目的建立并验证测定14型肺炎球菌多糖(pneumococcal capsular polysaccharide serotype 14,PS14)浓度的双抗体夹心ELISA。方法采用Protein G亲和层析纯化兔血清,得到兔抗PS14多克隆抗体(多抗)。以鼠抗PS14单克隆抗体(单抗)为捕获抗体,兔抗PS14多抗为检测抗体,碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG为二抗,PS14为参考品建立双抗体夹心ELISA。确定鼠抗PS14单抗和兔抗PS14多抗的工作浓度,建立标准曲线,并验证该方法的准确性、精密度和特异性,考察佐剂对该方法的影响。结果鼠抗PS14单抗的最适工作浓度为5 μg/ml,兔抗PS14多抗的最适工作浓度为1 μg/ml,标准曲线的范围为9.375 ～ 600.000 ng/ml,线性良好,相关系数为0.999。测定多糖样品的PS14回收率为110% ～ 140%,多糖蛋白结合物样品的PS14回收率为90% ～110%。平均批内和批间精密度分别是5.64%和7.14%。13价结合物混合样品的PS14回收率为85%～100%;含有佐剂的疫苗样品的PS14回收率为85% ～110%。结论成功建立了双抗体夹心ELISA,该方法准确性、精密度、特异性良好,且检测结果不受佐剂的影响,具有一定耐用性。

• 单位
  成都生物制品研究所有限责任公司