一种稳定高效的新生大鼠皮质神经元原代培养方法

作者：马万; 袁文俊; 焦英甫; 王春生; 陈桂英; 孟尽海

来源：神经解剖学杂志, 2015, 31(04): 510-514.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2015.04.0024

• 大脑皮质
• 神经元
• 原代培养
• 新生大鼠

目的:建立一种稳定、高效、简单可行的新生大鼠大脑皮质神经元原代培养方法。方法:取新生24 h内的SD大鼠,分离皮质,采用木瓜蛋白酶消化、实验前多聚赖氨酸铺板、不同机械吹打次数及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基的培养方法,MTT比色法分析检测神经元细胞成活率;于不同时间在倒置相差显微镜下观察细胞的生长状态;利用神经元特异性标志物微管蛋白相关标志物2(microtubule associated protein 2,MAP2)鉴定神经元纯度。结果:木瓜蛋白酶明显增加原代培养神经元细胞活力(P<0.01),采用适度的机械吹打、实验前多聚赖氨酸铺板及细胞接种2 h后全量换为添加B-27的Neurobasal A培养基,对神经细胞的活力没有明显的影响(P>0.05)。大部分皮质神经元具有典型的神经元形态特征,经MAP2免疫荧光技术鉴定神经元所占比例达95%以上。结论:该方法操作简单高效,方便可行,结果稳定。

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学; 宁夏医科大学; 宁夏医科大学总医院