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摘要
五倍子（Gallnut）是中国传统中药材，源自五倍子蚜叮咬盐肤木（Rhus chinensis Mill.）等植物形成的“虫瘿”结构，其主效成分没食子单宁可达干重的70%左右，是解析植物水解单宁生物合成途径和“虫瘿”形成机理的理想材料。实时荧光定量PCR （quantitative Real-time polymerase chain reaction， qRT-PCR）作为从基因表达水平研究基因功能的重要方式之一，其结果的准确性需要表达恒定的内参基因。为此，该研究从盐肤木转录组数据中筛选了12个常用的候选内参基因(酰基载体蛋白（acyl carrier protein， ACP）， 转录延伸因子（elongation factor 1 alpha， EF1α）， 翻译起始因子2 （eukaryotic translation initiation factor 2， EIF2）， 翻译起始因子3C （eukaryotic translation initiation factor 3C， EIF3C） 甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase， GAPDH）， 丝氨酸苏氨酸磷酸化酶基因1 （serine/threonine protein phosphatase 2A1， PP2A1）， 丝氨酸苏氨酸磷酸化酶基因2 （serine/threonine protein phosphatase 2A2， PP2A2）， 核糖体蛋白（ribosomal protein， RP）， 小谷氨酰胺三角四肽重复区蛋白（small glutamine-rich tetratricopeptide repeat-containing protein， SGT）， 多聚泛素蛋白基因（polyubiquitin， UBQ）， β微管蛋白（β-tubulin， β-TUB）， 组蛋白（histone， H3）)，利用qRT-PCR技术检测了这些候选基因在盐肤木不同组织部位（根， 茎， 叶， 雄花， 雌花， 种子， 胚性愈伤， 非胚性愈伤， 早期胚， 0 d叶翅， 21 d倍子， 69 d倍子， 105 d倍子）、不同植物激素(萘乙酸（1-Naphthlcetic acid， NAA）; 6-苄氨基嘌呤（6-Benzylaminopurine， 6-BA）; 赤霉素（gibberllic acid， GA）; 1-氨基环丙烷羧酸（1-Aminocyclopropanecarboxylic acid， ACC）; 脱落酸（abscisic acid， ABA）; 水杨酸（salicylic acid， SA）; 茉莉酸甲酯（methyl jasmonate， MeJA）)诱导以及不同非生物胁迫(4 ℃， 37 ℃， 100 mmol/L NaCl， 300 mmol/L Mannitol， 50 mg/kg CdCl2)处理下的表达变化，通过使用多个分析软件（geNorm， BestKeeper， NormFinder， RefFinder网站）对12个候选内参基因的稳定性进行评估。结果表明PP2A2基因在所有30个盐肤木样品中表达最稳定，并以该内参基因检测盐肤木热休克蛋白90 （90 kD heat shock protein， HSP90）、生长素/吲哚乙酸基因（auxin/indole-3-acetic acid， AUX/IAA）及生长素酰胺合成酶基因（gretchen hagen， GH）基因的表达，进一步验证了筛选结果的可靠性。该研究结果可为后续盐肤木基因表达分析提供参考，并为解析该植物中特有的生物学现象的分子机制提供科学依据。
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