鹅细小病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及应用

作者：魏中锋; 曹维伟; 郭璐; 刘博; 李俊芳; 毕研丽; 王文秀^*; 杨增岐^*

来源：动物医学进展, 2023, 44(05): 33-37.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2023.05.012

• 鹅细小病毒
• 荧光定量PCR
• 建立
• 应用

为探讨鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)在鹅胚上皮细胞(goose embryo epithelial cells, GEEC)中的增殖规律，研究采用荧光染料SYBR GreenⅠ渗入法，建立了检测GPV的荧光定量PCR方法，并用该方法分析了GPV在GEEC中的生长情况，绘制了生长曲线。结果显示，鹅细小病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法建立的标准曲线具有良好的重复性和特异性，与模板浓度呈现良好的线性关系。在线性浓度范围内，随着模板量的减少，其对应的Ct值相应增大，得到的标准曲线方程为y=-3.341 2x+38.494,相关系数R2为0.998。特异性试验结果显示检测新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)、鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus, DHAV)、禽腺病毒(Avian adenovirus, FAdV)均为阴性。敏感性试验结果显示最低检测限为100拷贝/反应，而普通PCR的最低检测限为1 000拷贝/反应，熔解曲线为单一特征峰型，熔解温度为80℃±0.5℃。病毒生长曲线绘制结果显示该病毒在GEEC细胞中有较好的增殖，72 h前病毒量逐渐增高，病毒量在72 h达到峰值。研究结果为GPV的定量检测提供了一种快速有效的方法。

• 单位
  西北农林科技大学; 山东省滨州畜牧兽医研究院