miR-30a对卵巢癌细胞PTEN/PI3K/AKT/mTOR自噬通路及顺铂耐药性的影响

作者：彭志霞; 贾佳; 于东坡; 张桦

来源：现代肿瘤医学, 2021, 29(18): 3143-3148.

• 微小RNA-30a
• 人卵巢癌细胞
• 顺铂耐药性
• 磷酸化-磷酸酶张力蛋白同系物/磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路

目的:探究miR-30a对人卵巢癌SKOV3细胞自噬及顺铂耐药性的影响,并初步研究其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞和人卵巢癌细胞(耐药)细胞(SKOV3/DDP);将SKOV3/DDP细胞随机分为对照组、miR-30a阴性对照(NC)组和miR-30a模拟(mimics)组,SKOV3细胞作为正常组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组细胞miR-30a表达情况;CCK-8法检测各组细胞顺铂耐药性;Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹分析法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3 I/II(LC3I/II)、p62、磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达情况;双荧光素酶报告基因检测系统验证miR-30a与PTEN的靶向关系。结果:与对照组和miR-30a NC组相比,miR-30a mimics组SKOV3/DDP细胞miR-30a表达水平、凋亡率、p62、p-PI3K、p-AKT及p-mTOR水平显著升高(P<0.05),IC50值、LC3II、PTEN蛋白表达水平及LC3II/LC3I比值显著降低(P<0.05);与正常组相比,对照组SKOV3/DDP细胞上述各指标变化趋势完全相反;mirbase数据库预测显示,miR-30a与PTEN mRNA 3’UTR区有结合位点,与PTEN-3’UTR-WT+miR-30a NC组比较, PTEN-3’UTR-WT+miR-30a inhibitor组荧光素酶活性降低(P<0.05)。结论:miR-30a可能通过靶向抑制PTEN表达,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路调控人卵巢癌细胞自噬,降低卵巢癌细胞的顺铂耐药性。

• 单位
  河南省肿瘤医院