一种提高质粒转染效率的质粒提取方法的优化

作者：胡小青; 肖广原; 张鹏; 陈厚早; 刘德培

来源：基础医学与临床, 2019, 39(5): 738-744.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6325.2019.05.026

• 质粒提取
• 质粒构型
• 低温
• 转染效率

目的 优化和改进质粒提取方法,以提高质粒的提取效率,增加其在哺乳动物细胞中的表达效率.方法 分别在室温条件和4℃条件提取质粒,并将细菌裂解、过柱和洗脱3个过程分解在两种温度下提取质粒;使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳分别检测质粒浓度和超螺旋形式;将质粒转染哺乳动物细胞,使用荧光显微镜和Western blot检测荧光蛋白的表达水平.结果 低温进行质粒提取能够显著提高质粒提取效率(P<0.05),并显著提高其在哺乳动物细胞中的表达效率(P<0.01).质粒提取的3个步骤:细菌裂解、过柱和洗脱均对温度敏感,从而影响质粒的得率和在哺乳动物细胞中的表达效率.结论 成功获得一种简单易行的提高质粒得率和在哺乳动物细胞中表达效率的质粒提取方法.

• 单位
  医学分子生物学国家重点实验室; 北京协和医学院; 中国医学科学院