猪Linda病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者:于浩洋; 史喜菊; 冯春燕; 王彩霞; 刘晓飞; 仇松寅; 吴绍强; 林祥梅*
来源:中国兽医科学, 2023, 53(11): 1384-1389.
DOI:10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0192

摘要

为建立猪Linda病毒(LV)的实时荧光定量PCR检测方法,本研究基于LV的Erns基因序列,设计并合成了实时荧光定量PCR引物和探针,经过优化退火温度、引物和探针的比例,建立了一种灵敏度高、特异性好且操作简便的LV实时荧光定量PCR检测方法。该方法具有良好的线性、稳定性及准确性,最低检出限为1×101copies/μL,批内和批间变异系数均小于2%,且该方法检测非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型时呈阴性。通过对不同模拟样品的检测结果进行比较分析,发现该方法能够检测到1×101copies/μL模拟DNA样品、1×101TU/mL模拟RNA样品。本研究建立的实时荧光定量PCR方法可用于LV的快速检测,为口岸检测、预防与控制由LV引起的进境仔猪先天性震颤提供了技术支持。

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