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摘要
非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是一种对猪(Sus scrofa)具有毁灭性的疾病，通常引发出血热，对养猪业危害巨大。多基因家族(multigene families, MGF) 505-5R位于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)基因组右侧可变区域(the right variable region, RVR)，能够影响病毒的毒力。本研究旨在分析MGF505-5R基因和蛋白的分子特征，构建MGF505-5R基因真核表达载体。根据ASFV参考基因组(GenBank No. MK128995.1)提取MGF505-5R基因序列进行生物信息学分析，并合成MGF505-5R基因片段。通过同源重组的方式将MGF505-5R基因连接至pRK5M-C-2×Strep载体。经PCR和测序鉴定后，将重组质粒pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R转染至猪小肠上皮细胞系(porcine intestinal columnar epithelial cells, IPEC-J2)中，通过免疫荧光和Western blot检测MGF505-5R的基因表达效果。通过qPCR检测过表达p RK5M-C-2×Strep-MGF505-5R的IPEC-J2细胞中外切体(exosome) 8个亚基、Mtr4外切体RNA解旋酶(Mtr4 exosome RNA helicase, MTREX)、末端核苷酸转移酶4A (terminal nucleotidyltransferase 4A,TENT4A)、锌指DHHC型棕榈酰转移酶16 (zinc finger DHHC-type palmitoyltransferase 16, ZDHHC16)基因的表达。生物信息学分析结果表明，MGF505-5R基因在系统发育树中分为3个分支，MGF505-5R蛋白在20、105和485位氨基酸存在正向选择。MGF505-5R蛋白的二级结构与三级结构相符，正选择位点均位于无规则卷曲上。PCR结果显示MGF505-5R基因片段成功连接至pRK5M-C-2×Strep载体中。免疫荧光和Western blot检测结果显示，MGF505-5R蛋白能够在猪IPEC-J2细胞中表达。qPCR结果显示，过表达pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R的IPEC-J2细胞中外切体组分(exosome component, EXOSC) 1、EXOSC2、EXOSC3、EXOSC4、EXOSC5、EXOSC7、EXOSC8、EXOSC10、TENT4A和ZDHHC16的表达量极显著降低(P<0.01);MTREX的表达量无显著变化。本研究对MGF505-5R分子特征的分析，为该基因的进化研究提供基础；构建MGF505-5R在猪IPEC-J2细胞的表达载体，为ASFV与宿主之间的蛋白质相互作用研究提供有效的工具和实验素材。
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