大鼠脑内突触后致密物蛋白质的提取及鉴定

作者：周颖; 黄志凌; 肖波; 吴小妹; 吴刘亦文; 杨璞

来源：基础医学与临床, 2009, (03): 305-308.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2009.03.007

• 突触后致密物
• 蔗糖密度梯度离心
• 膜顺序提取
• 双向凝胶电泳

目的提取纯度高、易分离溶解的突触后致密物(PSD)蛋白质。方法应用蔗糖密度梯度离心法,逐次获取P2,突触小体和PSD-1;应用Western blot检测PSD-1蛋白质的纯度;对PSD-1运用膜顺序提取法获取可溶性蛋白PSD-2;应用双向凝胶电泳技术分离PSD-1与PSD-2蛋白质点,PDQuest软件分析比较其数目差异。结果突触后标志分子PSD-95在P2成分、突触体和PSD-1 3组成分中均呈免疫染色阳性,而突触前标志分子突触素在PSD-1成分中呈免疫阴性。从PSD-1蛋白中电泳分离到286±25个蛋白质点而显著低于从PSD-2中分离到720±17个蛋白质点(P<0.01)。结论蔗糖密度梯度离心联合膜顺序提取法可获得纯度高、易分离溶解的PSD蛋白质。

• 单位
  中南大学湘雅医院; 中南大学湘雅二医院