PPARδ基因RNA干扰慢病毒载体的构建及稳定干扰结肠癌细胞株KM12C的建立

作者：蒋小; 杨烈; 周总光; 李园; 王玲; 于永扬; 王存

来源：生物医学工程学杂志, 2012, 27(02): 400-406.

• 过氧化物酶体增殖因子活化受体δ
• 结直肠癌
• RNA干扰
• 慢病毒
• KM12C

大肠癌是常见的恶性肿瘤,其发病率和病死率正逐年递增。过氧化物酶体增殖因子活化受体δ(peroxisome pro1iferator-activated receptorδ,PPARδ)是结肠腺瘤性息肉基因通路的下游靶标,很可能参与了大肠癌发病机制。然而,目前对该基因在大肠癌中的功能尚未阐明。本实验采用慢病毒三质粒包装系统构建特异靶向人PPARδ基因的RNA干扰(RNAinterference,RNAi)慢病毒载体,用以建立PPARδ基因稳定沉默的结肠癌细胞株。测序证实,成功构建编码表达PPARδ短发夹结构RNA(sh-PPARδ)的慢病毒载体pLVshPPARδ以及对照载体pLVControl。病毒载体转导结肠癌细胞株KM12C后,荧光显微镜及流式细胞术(fluorescence-activated cell sorting,FACS)证实细胞转染效率>90%,RT-PCR测定实验组KM12C细胞PPARδ的mRNA表达比未处理细胞下降70%,对照组与未处理细胞无显著差异。Western blot显示实验组PPARδ蛋白表达量比未处理细胞明显下降,对照组与未处理细胞无显著差异。结果显示成功构建特异靶向人PPARδ基因的RNAi慢病毒载体,并成功建立PPARδ表达稳定干扰的人结肠癌细胞株KM12C,为PPARδ在大肠癌中的功能研究提供了新的细胞模型。

• 单位
  生物治疗国家重点实验室; 四川大学华西医院