多种一步法快速提取DNA对肺炎支原体PCR检测的影响

作者：张军鸽; 赵飞; 刘立雍; 马闪珊; 单小云^*

来源：疾病监测, 2018, 33(06): 503-509.

• 一步提取法
• 肺炎支原体
• 聚合酶链反应
• 临床标本

目的对比不同一步法提取DNA在肺炎支原体PCR检测中的效果及应用范围,为临床标本中肺炎支原体的检测提供依据。方法以两种经典的DNA提取一步法(ROSE和Chelex-100法)及其优化方案和商品化DNA提取试剂盒,提取肺炎支原体纯培养菌株及30份肺炎支原体阳性临床咽拭子标本DNA,分别进行普通PCR和荧光PCR检测,对比不同方法提取的DNA对PCR检测结果的影响。结果 ROSE法和Chelex-100一步法中的SDS严重影响Taq酶活性,提取物稀释100倍方可进行荧光PCR扩增,稀释10倍可用于普通PCR扩增。改良的Chelex-100一步法提取肺炎支原体纯菌DNA产量最高,且PCR扩增效果最好。对于30份临床标本来说,试剂盒法、改良Chelex-100法和水煮法的阳性率分别为100.00%(30/30)、80.00%(24/30)和43.33%(13/30),且对相同肺炎支原体阳性标本提取的DNA,试剂盒法检测的循环阈值(Ct值)比上述两种方法分别小1.95和2.38。结论经典一步法提取的DNA必须经稀释后方可作为扩增模板。改良的Chelex-100法操作简便,可用于纯菌培养的DNA提取。临床标本中肺炎支原体DNA提取以试剂盒法最优,改良的Chelex-100法提取的DNA也可用于临床标本中肺炎支原体的检测,但不可用于定量分析。

• 单位
  中国疾病预防控制中心传染病预防控制所; 浙江省金华市中心医院