镉致肾细胞损伤中氧化应激及N6-甲基腺苷修饰酶表达变化

作者：何作顺; 李萌竹; 谷仕艳

来源：环境与职业医学, 2020, 37(09): 897-902.

DOI：10.13213/j.cnki.jeom.2020.20169

• HK-2细胞
• 氧化应激
• 甲基转移酶
• 去甲基化酶
• 甲基结合蛋白

[背景]N6-甲基腺苷(m6A)修饰酶可参与细胞损伤过程,但m6A修饰酶在镉引起肾细胞损伤中有何变化尚不清楚。[目的]观察CdSO4致肾小管上皮细胞(HK-2细胞)损伤过程中m6A修饰酶的变化水平。[方法]以不同浓度CdSO4(0、4、8、16μmol·L-1)处理HK-2细胞24 h后对相应指标进行检测。用Hoechst染色法观察细胞凋亡水平,镜下随机选取视野计数正常细胞和凋亡细胞,计算细胞凋亡率,利用相应试剂盒检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性、丙二醛(MDA)含量,以蛋白免疫印迹法检测m6A甲基转移酶中的甲基转移酶样3(METTL3)和脂肪量与肥胖相关蛋白(FTO)的蛋白表达水平,荧光定量PCR法检测YTH结构域家族蛋白1(YTHDF1)和YTH结构域家族蛋白3(YTHDF3)的mRNA水平。[结果]经0、4、8、16μmol·L-1 CdSO4处理后,细胞凋亡率依次为6.83%、5.17%、21.17%、35.80%;4、8、16μmol·L-1组SOD活性依次是(15.41±0.96)、(13.57±1.42)、(10.96±0.61)×103U·g-1,与"0"组相比,各组均有降低(P <0.05)。GSH-PX活性在CdSO4浓度为8μmol·L-1时降低至(8.74±3.91)U·g-1,而在8、16μmol·L-1 CdSO4作用时,MDA含量分别升高至(87.69±3.05)、(93.42±4.71)μmol·g-1(P <0.05)。蛋白免疫印记结果显示,METTL3蛋白相对表达水平在4、8、16μmol·L-1时分别升高至"0"组的1.09、1.25、1.33倍,FTO蛋白相对表达水平在8、16μmol·L-1时分别为0.81和0.74(P <0.05)。在CdSO4浓度为4μmol·L-1时,YTHDF1的mRNA水平是"0"组的7.62倍,YTHDF3的mRNA水平在4、16μmol·L-1 CdSO4作用时是"0"组的2.65、2.26倍(P <0.05)。[结论]在CdSO4致HK-2细胞发生损伤过程中,m6A修饰酶METTL3和FTO的蛋白水平以及YTHDF1和YTHDF3的mRNA水平发生不同程度的变化。

• 单位
  公共卫生学院; 大理大学