Cpf1和Cas9核酸酶靶向EGFR-L858R突变的研究

作者：魏恒; 杨梅佳; 钟坤宏; 仝爱平

来源：四川大学学报(自然科学版), 2018, 55(02): 401-406.

• 表皮生长因子
• 规律成簇间隔短回文重复
• 靶向治疗

表皮生长因子受体(EGFR)单核苷酸突变(2573T>G,L858R)占所有EGFR突变的90%.使突变的EGFR失活对有此突变的病人非常有利.这里,应用双荧光报告分析的方法分析规律成簇间隔短回文重复(CRISPR)系统中Cpf1和Cas9在靶向EGFR-L858R突变的编辑效率.在EGFR-L858R突变位点的附近,有两个Cpf1前间区序列邻近基序(PAMs)——TTTN.并且,2573T>G突变形成了一个Cas9的PAM——NGG.因此本文通过构建两条AsCpf1的gRNAs(gRNA1和gRNA2)和一条SpCas9的gRNA(gRNA3)在体外通过双荧光蛋白分析系统去评估SpCas9和AsCpf1特异性靶向等位基因的能力.结果证实了AsCpf1和SpCas9都能够特异性的编辑突变的EGFR(2573T>G).

• 单位
  四川大学; 四川大学华西医院; 生物资源与生态环境教育部重点实验室; 生命科学学院