银杏酚酸通过ERK-JNK-AKT途径诱导前列腺癌细胞p53依赖性凋亡

作者：杨波; 杜岳峰; 马帅军^*

来源：山西医科大学学报, 2022, 53(05): 532-542.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2022.05.005

• 前列腺癌
• 银杏酚酸
• p53
• 细胞凋亡
• ERK-JNK-AKT途径

目的 探究银杏酚酸对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法 (1)将DU145细胞用不同浓度银杏酚酸(0,2.5,5,10,20,40,80,160μmol/L)培养48 h,通过MTT法检测细胞活力，通过AnnexinⅤ-FITC/PI染色法检测细胞凋亡。(2)将DU145细胞用0,80μmol/L的银杏酚酸培养48 h,作为对照组和80μmol/L银杏酚酸组(GA组)。通过Western blot检测凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3和P53)的表达。(3)将DU145细胞分为8组：正常对照组、银杏酚酸组(GA组)、PD98059组、银杏酚酸+PD98059组(GA+PD98059组)、SP600125组、银杏酚酸+SP600125组(GA+SP600125组)、LY294002组、银杏酚酸+LY294002组(GA+LY294002组)。对照组细胞不使用药物处理，GA组细胞使用80μmol/L的银杏酚酸培养48 h, PD98059组细胞使用50μmol/L的PD98059培养48 h, GA+PD98059组细胞使用80μmol/L的银杏酚酸和50μmol/L的PD98059共培养48 h, SP600125组细胞使用50μmol/L的SP600125培养48 h, GA+SP600125组细胞使用80μmol/L的银杏酚酸和50μmol/L的SP600125共培养48 h, LY294002组细胞使用50μmol/L的LY294002培养48 h, GA+LY294002组细胞使用80μmol/L的银杏酚酸和50μmol/L的LY294002共培养48 h,然后通过MTT法检测细胞活力，通过AnnexinⅤ-FITC/PI染色法检测细胞凋亡。(4)将BALB/c小鼠随机分为生理盐水组(NS组，n=6)、银杏酚酸低剂量组(GA-L组，10 mg/kg,n=6)、银杏酚酸中剂量组(GA-M组，50 mg/kg,n=6)、银杏酚酸高剂量组(GA-H组，100 mg/kg,n=6)。所有小鼠皮下接种DU145细胞(4×105)建立荷瘤小鼠模型，接种第8天开始进行药物治疗。NS组小鼠腹腔注射生理盐水，GA-L组、GA-M组和GA-H组小鼠分别腹腔注射10,50,100 mg/kg的银杏酚酸，每周腹腔注射3次。每7 d用卡尺测量肿瘤大小。通过TUNEL染色检测肿瘤组织中的细胞凋亡。通过免疫组化染色检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的蛋白表达。通过Western blot检测肿瘤组织中Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、P53、p-ERK、p-JNK和p-AKT的蛋白表达。结果 与0μmol/L比较，5,10,20,40,80,160μmol/L银杏酚酸处理后DU145细胞活力降低，细胞凋亡率升高(均P<0.05)。与对照组比较，GA组DU145细胞中Bax、cleaved-Caspase-3和P53蛋白表达水平升高，而Bcl-2、p-ERK、p-JNK和p-AKT蛋白表达水平降低(均P<0.05)。与对照组相比，GA组、PD98059组、SP600125组和LY294002组细胞活力降低，细胞凋亡率升高(P<0.05)。与NS组相比，GA-L组、GA-M组和GA-H组肿瘤体积降低，肿瘤组织中TUNEL阳性率升高(均P<0.05)。与NS组相比，GA-L组、GA-M组和GA-H组肿瘤组织中Bax、cleaved-Caspase-3和P53蛋白表达水平均升高，而Bcl-2、p-ERK、p-JNK和p-AKT蛋白表达水平均降低(P<0.05)。结论 银杏酚酸可能通过ERK-JNK-AKT途径诱导前列腺癌细胞p53依赖性凋亡。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 西安交通大学第一附属医院; 西京医院