α烯醇化酶靶向RNA干扰对原代培养乳鼠心肌细胞能量代谢及收缩功能的影响

作者：朱理安; 方宁远; 高平进; 金贤; 汪海娅

来源：中华高血压杂志, 2008, 16(01): 41-45.

DOI：10.3969/j.issn.1673-7245.2008.01.013

• α烯醇化酶
• RNA干扰
• 心肌细胞

目的采用RNA干扰技术抑制培养大鼠心肌细胞α烯醇化酶的表达,探讨α烯醇化酶对心肌细胞能量产生和收缩功能的影响。方法针对α烯醇化酶基因,化学合成3对小片段干扰RNA(siRNA)(分别为针对α烯醇化酶mRNA 406～425位点的序列1,针对α烯醇化酶mRNA 656～675位点的序列2及针对α烯醇化酶mRNA 754～773位点的序列3)并转染原代培养的WKY大鼠心肌细胞。采用Real-time RT-PCR和Western blot技术分别在mRNA和蛋白水平检测α烯醇化酶的表达情况,筛选其中沉默效应最好的序列(序列1)转染心肌细胞,即RNA干扰实验组,以未转染siRNA的心肌细胞为对照组,荧光素荧光素酶法检测细胞ATP水平,视频跟踪计算机测定系统测定细胞收缩反应,参数包括最大收缩幅度(dL),最大收缩速度(dL/dt_(max))。结果针对α烯醇化酶mRNA 406～425位点的siRNA显著下调α烯醇化酶mRNA和蛋白的表达,并且呈剂量和时间依赖关系,200 nmol/L可达到最大沉默效应,其下调α烯醇化酶mRNA和蛋白表达的最大效应分别出现在转染后24 h和48 h。α烯醇化酶沉默后细胞ATP产生减少(3.55×10~(-7)nmol/mg蛋白),dL[(0.82±0.02)μm]和dL/dt_(max)[(2.7±0.3)μm/s]下降。结论应用siRNA技术靶向α烯醇化酶mRNA 406～425位点可有效下调心肌细胞α烯醇化酶的表达,使细胞产能减少,收缩功能下降。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院; 上海交通大学医学院附属瑞金医院; 上海市高血压研究所