无血清培养杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺研究

作者：王蓓; 姚慧丽; 庞晓晨; 李宜波; 周珊; 屈浩; 刘红芹; 廖晓龙^*

来源：中国医学装备, 2023, 20(06): 166-171.

• 无血清培养杂交瘤细胞
• WAVE-25生物反应器
• 工艺探索

目的：在WAVE-25生物反应器上，探讨抗人CD52杂交瘤细胞无血清流加培养方式的工艺条件，通过多种抗体质量检测加以验证，建立规模化的生产工艺，为后期的工艺放大提供参考。方法：探索无血清培养CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器的工艺参数，在反应过程中依据活细胞密度、活率、pH值、溶氧以及免疫球蛋白G(IgG)含量、葡萄糖(Gluc)、谷氨酰胺(L-Gln)、乳酸(Lac)、铵根离子(NH4+)等生长代谢参数进行过程监测和调控；通过蛋白纯化，利用流式细胞术，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)对CD52单克隆抗体纯品(简称CD52纯抗)进行特异性和纯度的检测和鉴定。结果：无血清培养CD52杂交瘤细胞通过流加培养方式在WAVE-25 2L生物反应器可稳定大规模培养，蛋白纯化后获得的CD52纯抗产率和质量得到显著提高，产率从100 mg/L提高至350 mg/L，提高了3.5倍；纯度从92%提高至100%；相同浓度下荧光强度提高了69%。结论：CD52杂交瘤细胞在WAVE-25生物反应器可大规模培养，通过工艺参数和反应过程中生化指标的调控获得的CD52纯抗产率和质量都有显著的提高，可为后续的大规模化生产提供参考。