贵州黑山羊GFI1B基因的原核表达、蛋白纯化及多克隆抗体制备

作者：储双凤; 陈志^*; 罗卫星; 蔡惠芬; 朱方超; 毛永江; 杨章平

来源：扬州大学学报（农业与生命科学版）, 2019, 40(06): 76-92.

DOI：10.16872/j.cnki.1671-4652.2019.06.013

• 贵州黑山羊
• GFI1B基因
• 原核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

独立生长因子1 (GFI1)及其同源物GFI1B是造血所需的谱系特异性转录因子,定位到人类基因组的9号染色体(9q34.13),编码一种331个氨基酸的多肽,GFI1和GFI1B均有6个C末端C2H2锌指和1个N末端SNAG (SNAIL/GFI1)转录抑制结构域。为进一步探索GFI1B的基因功能,公开一种贵州黑山羊新基因GFI1B多克隆抗体的制备方法,将在实验室中克隆的山羊GFI1B基因序列首先用于在原核载体中表达,并进行原核表达载体pET32a-GFI1B的构建,再进行GFI1B蛋白的原核表达,最后进行GFI1B蛋白的纯化和大白兔GFI1B多克隆抗体的制备与纯化。结果表明:高效表达了原核表达载体pET32a-GFI1B,纯化的His-GFI1B融合蛋白可满足制备多克隆抗体的要求; ELISA检测结果显示,GFI1B多克隆抗体可与His-GFI1B融合蛋白进行特异性结合,制备出高度特异的山羊GFI1B多克隆抗体。该方法获得的多克隆抗体效价高、特异性好,弥补了GFI1B羊上的多克隆抗体的研究空白。

• 单位
  动物科学学院; 扬州大学; 贵州大学