产碱性淀粉酶重组枯草芽孢杆菌的构建与发酵优化

作者：王静丽; 刘松; 堵囯成; 陈坚

来源：食品与生物技术学报, 2016, 35(03): 296-302.

• 碱性淀粉酶
• 信号肽
• 重组枯草芽孢杆菌
• 发酵优化
• 碳酸钠

碱性淀粉酶催化淀粉在碱性环境中高效降解,广泛应用于纺织退浆、洗涤、制药等领域。通过信号肽筛选,将来源于嗜碱单胞菌Alkalimonas amylolytica的碱性淀粉酶基因于枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis WB600实现分泌表达,并优化了重组菌产酶的发酵条件。在最佳信号肽ywb N介导下,重组B.subtilis发酵51 h,胞外Amy K酶活最高达146.86 U/m L,且能在发酵上清液中检测到与Amy K理论相对分子质量(60 k Da)一致的蛋白质条带。通过单因素实验优化了发酵培养基(糊精32 g/L,蛋白胨12 g/L,酵母粉24 g/L,KH2PO42.32 g/L,K2HPO4·3H2O 16.43 g/L),并在发酵24 h后添加0.2 g/d L Na2CO3调节发酵液p H,发酵72 h胞外Amy K酶活达640.33 U/m L,较优化前提高了336%,是目前已报道重组B.subtilis产碱性淀粉酶的最高水平。研究结果为Amy K发酵生产的工业化提供了数据支撑。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学; 食品科学与技术国家重点实验室