构建肾小管上皮细胞衰老模型的研究

作者：张宇; 柏云; 魏璐; 张娟; 赵卫红^*

来源：中华老年医学杂志, 2021, 40(10).

• 肾小管, 近端
• 细胞衰老
• 半乳糖
• 过氧化氢
• 顺铂

目的运用不同药物诱导肾小管上皮细胞衰老模型并进行比较。方法分别用不同浓度D-半乳糖(D-gal)、过氧化氢(H2O2)、顺铂(CDDP)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK2), 采用CCK8法检测细胞活性及半数抑制浓度(IC50);衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测细胞衰老水平;蛋白免疫印迹法(western blotting)分析衰老相关基因表达;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡。通过苏木精-伊红(HE)染色观察D-gal模型鼠和自然衰老鼠的肾小管及间质病理变化, 免疫组化检测p16表达水平。结果 CCK8结果显示, 体外给予3种药物处理后HK2活性均受到抑制, 48 h IC50值分别为D-gal(365.8±9.7)mmol/L、H2O2(385.4±20.8)μmol/L、CDDP(8.4±1.6)μmol/L。光镜下可见3组HK2细胞生长均减慢, 且SA-β-gal阳性率较对照组均增加(P<0.05)。400 mmol/L D-gal和400 μmol/L H2O2处理后G0/G1期细胞较对照组分别增加(22.9±1.0)%和(13.0±4.4)%, 而8 μmol/L CDDP组G2/M期细胞增加(14.4±1.9)%(t=48.07、6.40、16.53, 均P<0.05)。与对照组, 400 μmol/L H2O2和8 μmol/L CDDP处理后HK2凋亡分别增加(50.3±1.0)%和(41.9±2.0)%, 明显高于400 mmol/L D-gal组(7.7±0.4)%(t=77.47、33.73、28.35, 均P<0.05)。Western blotting结果提示3种药物达到一定浓度后, HK2细胞CCND1蛋白表达均下调。D-gal组p16表达上调(F=92.88, P<0.05), 而H2O2和CDDP组p16的表达差异无统计学意义。实验结果显示, D-gal模型鼠可见与自然衰老鼠相似的肾小管上皮细胞数目减少、基底膜增厚、间质增宽, 且肾小管上皮细胞p16表达增加。结论比较3种不同造模方式诱导的HK2衰老, D-gal诱导的肾小管上皮细胞衰老模型相对接近自然衰老。

• 单位
  南京医科大学第一附属医院