重组牛IFN-γ蛋白在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化和鉴定

作者：王睿男; 蒋菲; 刘亚涛; 宋晓晖; 刘永生; 王文; 储岳峰; 曹小安; 王传彬; 孙雨^*

来源：中国草食动物科学, 2021, 41(02): 39-43.

• 重组牛IFN-γ蛋白
• 杆状病毒
• 真核表达
• 蛋白纯化

为合成与天然构象相似的干扰素γ蛋白,通过优化干扰素序列的密码子序列,利用杆状病毒表达系统合成真核重组牛IFN-γ蛋白。实验化学合成牛IFN-γ基因,并将该基因克隆至真核表达载体pFastBacHTA中,将构建成功的重组载体与DH10Bac感受态大肠杆菌进行转座形成穿梭载体,穿梭载体质粒瞬时转染至SF9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒,最后利用SF9昆虫细胞悬浮培养大量表达目的蛋白。蛋白纯化后经Western Blotting和BOVIGAM牛分枝杆菌IFN-γELISA检测试剂盒检测分析,具有较好的免疫原性和反应原性。研究结果为牛IFN-γ的单克隆抗体制备以及牛结核病临床诊断奠定了基础。

• 单位
  中国动物疫病预防控制中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所