苯扎贝特对牛主动脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及其机制的研究

作者：王燕; 王炎; 汪道文

来源：中华心血管病杂志, 2006, (06): 530-536.

• 苯扎贝特
• 内皮,血管
• 一氧化氮合酶
• 基因表达

目的研究过氧化物酶体增生物激活受体α(peroxisomeproliferator-activatedreceptoralpha,PPARα)的配体苯扎贝特对原代牛主动脉内皮细胞(bovineaortaendothelialcells,BAEC)一氧化氮合酶(endothelialnitricoxidesynthase,eNOS)基因表达的影响并探讨其机制。方法分离和培养牛主动脉内皮细胞,采用Northern印迹法、Western印迹法检测苯扎贝特对BAECeNOSmRNA和蛋白质表达的影响,采用定量PCR的方法及NO试剂盒检测苯扎贝特对eNOSmRNA半衰期及NO产生的影响;继而采用Western印迹法,给予不同的信号转导通路抑制剂研究苯扎贝特影响eNOS表达所通过的信号转导途径,此外,构建了由人eNOS启动子驱动的荧光报告基因,研究苯扎贝特对eNOS启动子活性的影响。结果苯扎贝特以浓度(50~200μmol/L)依赖的方式明显上调BAEC细胞eNOS的mRNA和蛋白质表达(P<0.05),并促进一氧化氮(nitricoxide,NO)的生成[对照组(14.97±1.29)μmol/L,苯扎贝特不同浓度组(25.12±1.25)μmol/L,(30.12±1.85)μmol/L,(33.47±1.22)μmol/L],增强eNOS-ser-1179位点的磷酸化表达(P<0.05),但是对eNOS-thr-497位点的磷酸化表达几乎没有抑制作用,定量PCR证实苯扎贝特增加eNOSmRNA的半衰期(从3.1~6.1h),进一步的研究显示苯扎贝特以浓度依赖的方式增加人eNOS启动子驱动的荧光报告基因的荧光活性(相对的荧光活性在100μmol/L和200μmol/L组分别为4429.43±391.41,6187.5±307.53,对照组为3361.81±316.85),增加磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)的蛋白质表达(P<0.05及P<0.01),而PPARα、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase,PI3K)和MAPK抑制剂可明显逆转苯扎贝特对eNOS表达的上调作用(P<0.01)。结论苯扎贝特通过上调eNOS的蛋白质表达、促进eNOS的磷酸化、增强eNOS的转录及eNOSmRNA的稳定性,从而促进NO的生成,其效应的发挥既通过依赖于PPARα的方式,也可以经MAPK和PI3K信号通路介导的不依赖于PPARα的“非基因效应”,揭示了PPARα的配基苯扎贝特的降脂外作用包括抗动脉粥样硬化和抗高血压的可能作用机制。

• 单位
  青岛市市立医院; 华中科技大学同济医学院附属同济医院