呼吸道合胞病毒滴度间接免疫荧光检测方法的建立及验证

作者：宋月爽; 陈晓旭; 潘东; 卢井才; 张立娜; 刘禹壮; 原秀娟; 段盛博; 袁若森^*; 赵慧^*

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(08): 1002-1012.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003684

• 呼吸道合胞病毒
• 间接免疫荧光法
• 病毒滴度

目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度的间接免疫荧光检测方法，并进行验证。方法 以Synagis(Palivizumab)为一抗，荧光标记羊抗人IgG为二抗，建立用于RSV滴度检测的间接免疫荧光法，并对HEp-2细胞接种密度(3×104、4×104、5×104、6×104、7×104、8×104个/孔)、细胞培养液中胎牛血清浓度(2.5%、5%、10%、20%)、病毒培养时间(20、24、26、30、38、48 h)、抗体稀释度[一抗：1∶(1 000/3)、1∶1 000、1∶3 000、1∶9 000，二抗：1∶(400/3)、1∶400、1∶1 200]进行优化。验证方法的特异性、线性范围、准确性、重复性。结果 建立的方法最佳工作条件：HEp-2细胞接种密度为6×104个/孔，胎牛血清浓度为2.5%，病毒培养时间为24～26 h，一抗稀释度为1∶1 000，二抗稀释度为1∶400。RSV可见特异性荧光，狂犬病病毒、流感病毒、风疹病毒均未见荧光；RSV滴度理论值在1.70×107～5.43×103FFU/mL范围内，与检测值呈良好的线性关系，回归方程为y=1.031 3 x-0.250 8,R2=0.989 7；准确性验证回收率在70%～130%范围内；重复性验证RSD均≤15%。结论 建立的RSV滴度间接免疫荧光检测方法具有良好的特异性、准确性、重复性，且检测周期短，可用于RSV滴度快速检测。

• 单位
  中国食品药品检定研究院; 吉林大学