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摘要
目的通过调节人结肠癌细胞HCT116及HCT116/L多药耐药细胞中LEF1(lymphoid enhancer factor-1,LEF1)的表达,以探讨LEF1对人结肠癌细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的影响及其对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的调控作用。方法应用LEF1过表达质粒pc DNA-LEF1和LEF1 siRNA上调及沉默人结肠癌细胞HCT116和奥沙利铂耐药细胞HCT116/L中的LEF1的表达,MTT法检测LEF1对HCT116和HCT116/L细胞化疗药物敏感性的影响;应用MDR1过表达质粒pc DNA-MDR1和MDR1 siRNA上调及沉默人结肠癌细胞HCT116-LEF1细胞(过表达LEF1细胞株)和HCT116/L-si LEF1(沉默LEF1奥沙利铂耐药细胞株)的MDR1的表达,MTT法检测MDR1对HCT116-LEF1细胞和HCT116/L-si LEF1细胞化疗药物敏感性的影响;real time-PCR、Western blot等方法检测多药耐药基因MDR1和P-gp蛋白的表达。结果 HCT116/L细胞中奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)和5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的半数抑制浓度(IC50)高于HCT116细胞(P<0.05),其LEF1、MDR1 mRNA和P-gp蛋白的表达水平均高于HCT116细胞(P<0.05)。过表达LEF1后,HCT116细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC50分别由(15.04±2.68)μmol/L和(5.89±2.77)μmol/L上升至(74.16±9.05)μmol/L和(35.02±6.19)μmol/L(P<0.05),P-pg的蛋白表达水平亦明显升高(P<0.05);沉默LEF1表达后,HCT116/L细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC50分别由(511.89±37.79)μmol/L和(220.22±66.33)μmol/L下降至(253.56±71.42)μmol/L和(94.94±25.45)μmol/L(P<0.05),P-gp的蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。沉默MDR1表达后,HCT116-LEF1细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC50分别由(85.68±8.46)μmol/L和(36.92±3.02)μmol/L下降至(29.86±5.93)μmol/L和(7.61±1.47)μmol/L(P<0.05)。过表达MDR1后,HCT116/L-si LEF1细胞对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的IC50分别由(216.55±49.63)μmol/L和(101.48±17.93)μmol/L上升至(351.46±23.31)μmol/L和(175.23±28.25)μmol/L(P<0.05)。结论 LEF1通过介导MDR1/P-gp的表达调控人结肠癌细胞HCT116对奥沙利铂和5-氟尿嘧啶的耐药,抑制LEF1过表达对于逆转结肠癌多药耐药具有重要意义。
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