基于Antares2的金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统的构建

作者：胡珍; 尚伟龙; 饶贤才^*

来源：陆军军医大学学报, 2023, 45(05): 393-399.

DOI：10.16016/j.2097-0927.202212145

• 金黄色葡萄球菌
• 生物发光
• 示踪系统
• 荧光素酶

目的 构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株，建立金葡菌示踪系统。方法 采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中，与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合，构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与不同的底物混合，检测生物发光强度差异，筛选合适的菌株/底物示踪系统，并探究其在体外和体内的敏感性。结果 通过构建基因敲入质粒pBT2-eno-antares2,转化金葡菌USA300菌株中进行基因敲入菌株筛选，经DNA测序和Western blot鉴定示踪菌株USA300/Eno-Antares2构建成功。细菌生长曲线和溶血实验表明所构建的示踪菌株与野生型USA300无明显差异。将示踪菌与DTZ、FUR和HFZ底物混合，肉眼均可观察到发光。不同浓度不同底物分析显示，USA300/Eno-Antares2/HFZ组成的系统发光性能最优，体外发光示踪的敏感性为50 CFU(菌落形成单位),小鼠体内示踪敏感性为100 CFU。结论 金葡菌USA300/Eno-Antares2/HFZ示踪系统性能佳，可用于金葡菌感染、定植、播散等研究。

• 单位
  第三军医大学; 中国人民解放军陆军军医大学; 基础医学院