温肾阳方及其拆方通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化

作者：薛纯纯; 王利波; 李晓锋; 施杞; 王开强; 王拥军; 舒冰

来源：中国中西医结合杂志, 2021, 41(09): 1100-1106.

• 温肾阳
• 骨碎补
• 淫羊藿
• 软骨生成
• 转化生长因子-β

目的探讨温肾阳方及方中单味中药骨碎补、淫羊藿是否通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化。方法分别采用温肾阳方(0.42 g生药/mL)、骨碎补(0.09 g生药/mL)及淫羊藿(0.09 g生药/mL)煎剂和等体积生理盐水给大鼠灌胃,制备含药血清,分离孕12.5天小鼠肢芽干细胞进行微团培养,含药血清干预后,CCK-8法检测肢芽干细胞增殖能力,阿尔新蓝染色检测软骨分化能力,IPP软件统计软骨球个数及面积,Real-time PCR法检测Col2a1及Aggrecan表达水平。采用293T细胞,脂质体转染TGF-β信号通路报告基因4×SBE,荧光素酶实验分析各组对TGF-β信号通路的调节作用。采用TGF-β信号通路抑制剂SB431542抑制肢芽干细胞中TGF-β信号通路,进行阿尔新蓝染色及软骨细胞外基质检测。结果与空白组比较,温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组干预48 h和72 h后小鼠肢芽干细胞增殖均增强(P<0.01,P<0.05)。阿尔新蓝染色显示,温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨球个数及面积增加(P<0.05),软骨细胞基质Col2a1及Aggrecan的表达增强(P<0.01)。荧光素酶实验发现,与空白组比较,各中药组TGF-β信号通路活性上调(P<0.01,P<0.05)。加入TGF-β信号通路抑制剂SB431542后,与空白组比较,抑制剂组软骨球个数及面积均明显减少(P<0.01);而温肾阳方、淫羊藿、骨碎补组软骨生成抑制显著缓解(P<0.05),但与空白组比较,软骨球个数及面积仍明显减少(P<0.01,P<0.05),Col2a1及Aggrecan水平也有相似的变化趋势(P<0.01)。结论温肾阳方及温肾阳药骨碎补、淫羊藿可以部分通过TGF-β信号通路促进小鼠肢芽干细胞增殖与分化。

• 单位
  上海中医药大学附属龙华医院; 上海中医药大学