武乡病毒TaqMan RT-PCR检测方法的建立

作者：胡丹鹤; 姚晓慧; 付士红; 李樊; 顾天梦; 陈骏捷; 何英; 殷佳宇; 许松涛; 殷启凯; 李向东; 聂凯^*; 王环宇^*; 梁国栋

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2022, 36(04): 460-464.

DOI：10.3760/cma.j.cn112866-20220310-00056

• 武乡病毒
• 实时荧光定量RT-PCR
• 检测

目的建立武乡病毒(wuxiang virus, WUXV)的实时荧光定量TaqMan反转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)检测方法。方法从GenBank中下载WUXV的全部基因序列, 使用MEGA-X完成多序列比对分析, 选择针对S段基因高保守区设计的引物和探针, 分别对检测反应的特异性、灵敏性和稳定性进行评价。结果建立的方法可以特异性地检测WUXV, 并且与多种虫媒病毒无交叉反应;反应的灵敏度较高, 最低检测下限为1 pfu/ml;同一样品重复检测循环阈值(Ct)的批间变异系数均小于1.00%;用本研究建立的TaqMan RT-PCR检测30批白蛉核酸样本, 其中7批出现WUXV阳性扩增曲线。结论本研究建立了灵敏度高、特异性强、重复性好的TaqMan RT-PCR方法可用于WUXV的大批量样本筛查。

• 单位
  扬州大学; 传染病预防控制国家重点实验室; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所