人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定

作者：庞小娟; 赵晓琴; 陈芳芳; 彭薇; 张弛; 臧宇辉; 罗冰; 虞伟; 秦浚川; 李晓军

来源：临床检验杂志, 2010, (01): 59-62.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2010.01.002

• 细胞分化抑制因子3
• 重组腺病毒
• 滴度测定
• 表达 inhibitors of differentiation 3
• recombinant adenovirus
• titer determination
• expression

目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-...

• 单位
  医药生物技术国家重点实验室; 南京军区南京总医院; 南京师范大学; 南京大学; 生命科学学院