腺苷受体及其介导的cAMP/PKA/CREB信号通路在高氧致早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤中的作用

作者：王席娟; 孙健伟; 张磊; 张美慧; 张家洁^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2022, 36(04): 347-351.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2022.04.006

• 支气管肺发育不良
• 高氧
• 腺苷受体
• 原代Ⅱ型肺泡上皮细胞
• 环磷酸腺苷
• 蛋白激酶A
• 环磷酸腺苷反应元件结合蛋白
• 大鼠

目的 探讨高氧对早产大鼠原代Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells, AECⅡ)腺苷受体及其介导的环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)/蛋白激酶A(protein kinase A, PKA)/cAMP反应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein, CREB)信号通路的影响。方法 取早产SD大鼠肺组织分离培养原代AECⅡ,分为常氧组和高氧组，分别在氧气浓度21%和95%条件下培养。采用CCK-8法检测细胞培养6、12、24、48、72 h时AECⅡ增殖的光密度值。分别取培养12、24、48 h时2组原代AECⅡ,采用实时荧光定量PCR法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3 mRNA相对表达量，采用Western blot法检测细胞腺苷受体A1、A2A、A2B、A3蛋白及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量，采用ELISA法检测细胞cAMP水平。结果 培养6 h时，高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值(0.69±0.01)与常氧组(0.68±0.02)比较差异无统计学意义(t=—0.698,P=0.520);培养12、24、48、72 h时，高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值(0.67±0.01、0.58±0.01、0.47±0.01、0.30±0.01)均低于常氧组(0.71±0.02、0.76±0.01、0.97±0.01、1.26±0.02)(P<0.05),随培养时间延长，高氧组原代AECⅡ细胞增殖的光密度值逐渐降低(P<0.05);培养24、48 h时，高氧组原代AECⅡ细胞腺苷受体A1、A3 mRNA和蛋白相对表达量均低于常氧组(P<0.05),A2A、A2B mRNA和蛋白相对表达量均高于常氧组(P<0.05);培养12、24、48 h时，随培养时间延长，高氧组原代AECⅡ腺苷受体A1、A3 mRNA和蛋白相对表达量均逐渐降低(P<0.05),A2A、A2B mRNA和蛋白相对表达量均逐渐增高(P<0.05)。培养12、24、48 h时，高氧组原代AECⅡ细胞cAMP水平及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量均高于常氧组(P<0.05),随培养时间延长，高氧组原代AECⅡ细胞cAMP水平及p-PKA、p-CREB蛋白相对表达量逐渐增高(P<0.05)。结论 高氧呈时间依赖性抑制早产大鼠原代AECⅡ细胞增殖，通过调节腺苷受体表达，激活其下游cAMP/PKA/CREB信号通路参与高氧相关AECⅡ损伤。

• 单位
  郑州大学; 河南省人民医院