结核分枝杆菌Ag85A蛋白的原核表达、纯化和免疫反应性

作者：邓毛子; 石春薇; 王芳; 付瑞玲; 王春; 方正明; 范雄林

来源：基础医学与临床, 2010, 30(02): 117-121.

DOI：10.16352/j.issn.1001-6325.2010.02.007

• 结核分枝杆菌
• Ag85A
• 原核表达
• 纯化
• 免疫反应性

目的通过原核表达获得结核分枝杆菌Ag85A蛋白。方法用PCR从结核分枝杆菌H37Rv菌株中扩增出编码Ag85A的fbpA基因,克隆入原核表达载体pProEXHTb,产生重组质粒pPro85A后,转化至大肠杆菌感受态细胞BL21并诱导大量表达。用镍纯化系统纯化重组Ag85A蛋白,用不同分枝杆菌感染的小鼠血清通过ELISA确定其免疫反应性。利用PCR技术鉴定fbpA基因在不同分枝杆菌的分布。结果32 ku的Ag85A蛋白获得高效表达和纯化。表达Ag85A蛋白的fbpA基因在结核分枝杆菌H37Rv、H37Ra、BCG、草分枝杆菌、土地分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和次要分枝杆菌中均有表达,但在牝牛分枝杆菌中未表达。结核病患者和结核分枝杆菌毒株H37Rv感染小鼠血清所产生的抗Ag85A抗体滴度最高。结论重组Ag85A蛋白已成功表达纯化,并保留了免疫反应性。

• 单位
  咸宁学院; 基础医学院; 华中科技大学同济医学院