茶尺蠖小RNA病毒全长cDNA克隆的构建

作者：林美娟; 谢键; 张珈敏; 叶姗; 胡远扬

来源：昆虫学报, 2010, (07): 818-823.

DOI：10.16380/j.kcxb.2010.07.015

• 茶尺蠖小RNA病毒
• 全长cDNA克隆
• 传染性软化病毒科
• 反向遗传学 Ectropis oblique picorna-like virus
• full-length cDNA clone
• Iflaviridae
• reverse genetics manipulation technique

为了初步研究茶尺蠖小RNA病毒(Ectropis oblique picorna-like virus,EoPV)的复制机制,从被EoPV感染致死的茶尺蠖幼虫中分离并纯化病毒粒子,提取病毒RNA,根据已公布的EoPV核苷酸序列,利用基因组上单一的酶切位点,设计特异性引物,应用RT-PCR扩增出5个覆盖全长的片段。随后采用融合PCR将5个片段拼接,最终将全长定向克隆到低拷贝质粒载体上,成功构建cDNA全长克隆p-EoPV。双酶切及测序鉴定证明全长克隆构建成功。与原序列比较发现,该克隆在氨基酸水平上有8个突变和1个缺失。本研究为深入探讨EoPV病毒生物学特性、病毒复制机理等奠定了基础。

• 单位
  生命科学学院; 病毒学国家重点实验室; 武汉大学