解偶联蛋白嵌合体及突变体的构建方法

作者：王超; 刘洋; 段秀梅; 田庄; 王银萍; 沃夫冈·格莱尔; 付彤

来源：吉林大学学报(医学版), 2013, 39(01): 174-179.

DOI：10.7694/jldxyxb20130139

• 解偶联蛋白
• 线粒体
• 钙离子通道 uncoupling proteins
• mitochondria
• Ca2+ channel

目的:构建解偶联蛋白(UCPs)嵌合体和突变体,为阐明解偶联蛋白家族功能结构域的研究提供条件。方法:采用普通PCR和重叠延伸PCR获得UCPs嵌合体基因片段,分别插入pCR2.1测序载体后进行测序,再以限制性内切酶连接方式将嵌合基因定向亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1中,获得pcDNAUCP1UCP2、pcDNAUCP2UCP1和pcDNAUCP3UCP1,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pcDNA。利用定向点突变产生pcDNA-UCP3R167G/pcDNA-UCP3RE171/172GG,并进行测序证实。结果:PCR和酶切,获得的目的基因与嵌合基因片段中包含的碱基数量吻合;...

• 单位
  吉林大学第一医院