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摘要
目的观察甲亢宁胶囊对人甲状腺正常细胞Nthy-ori-3-1凋亡的影响,基于磷酸腺甙活化蛋白激酶(AMPK)-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨甲亢宁胶囊干预Graves病(GD)的影响。方法 M22诱导人甲状腺滤泡上皮细胞株(Nthy-ori-3-1)建立GD细胞模型,设对照组、模型组、空白血清组、甲亢宁含药血清低剂量组、甲亢宁含药血清中剂量组和甲亢宁含药血清高剂量组。CCK8检测甲亢宁含药血清高、中、低浓度干预Nthy-ori-3-1增殖的抑制率;ELISA检测各组细胞上清液中cAMP释放量;流式细胞术检测各组Nthy-ori-3-1细胞凋亡情况;qRT-PCR检测各组B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2-相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(Caspase-3)mRNA表达;Western Blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、AMPK、mTOR、p-AMPK、p-mTOR蛋白表达。结果甲亢宁含药血清各剂量组Nthy-ori-3-1细胞凋亡率较模型组增高(P<0.05),且随着药物浓度升高,细胞凋亡率越高(P<0.05)。与对照组比较,模型组的cAMP释放量升高,Bax、Bcl-2、Caspase-3mRNA表达量及蛋白表达升高,p-AMPK、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,甲亢宁含药血清低、中、高剂量组cAMP释放量减低,Bax、Caspase-3 mRNA及蛋白表达升高,Bcl-2 mRNA及蛋白表达、p-mTOR蛋白表达降低(P<0.01);同时,甲亢宁含药血清中、高剂量组p-AMPK蛋白表达升高(P<0.01)。结论甲亢宁含药血清促进细胞凋亡,对GD细胞凋亡的调控作用可能与通过激活AMPK-mTOR信号通路有关。
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